2.---基因心片
---基因芯片通常涉及基因组规模与数量(一般大于10000个基因),分别采用接触式点样、非接触式点样或者半导体技术制备样品。接触式点样方法包括点样元件或点样元件中的液体和芯片基片间有直接接触的各种方法。非接触式芯片制备方法包括各种芯片制备中不需点样元件和芯片基片间直接接触的各种技术,其样头的是以可控的方式从喷嘴中喷出小体积的液滴。半导体制备技术指借鉴计算机芯片制造业中的微型化加工方法的基因芯片制备技术。基因芯片的工作流程如下:
(1) 经---pcr扩增获得独立cdnva插入片段。
(2)用机械手将 pcr产物点在玻璃板上,江苏蛋白固化,变性、固定。
(3)分 别---同或组织中分离mrna.反转录生成cdna.
(4)用 不同的荧光染料标记不同或组织的cdna。
(5)将标记好的 cdna与点好的芯片进行杂交。
(6)激光扫描芯片杂交结果, 计算机处理。
(7)分 析杂交数据。
二、黏附剂的使用
1.多聚左旋赖氨酸(poly-1-lysine)
首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液,室温下(18~26℃)可保存1年。使用时,将试剂10倍稀释成工作液,浓度为0.01%(ω/υ),2-8℃冰箱保存,有效期3个月。使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次,沥干.于室温下晾干12-24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可保存三个月。
目前, 在医学研究中 , 数据分析方法在总体---为两大类:无监控集簇分析和有监控集簇分析。前者比较单纯的从数学角度按照基因表达的相似性将基因分组 , 这有助于发现新的目的基因或提供新的---信息 , 如新的分型 、 影响预后的因素等。后者需要结合现有的知识进行分析, 适用于---归类。这对于传统诊断手段是一个有益的补充。
另外,蛋白固化素, 在目前进行的许多微阵列芯片研究中,每次研究的基因数目很大 , 而参与实验的样本量较少。这一现象不利于得到稳定的和具有---可重复性的实验结果。
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