微阵列芯片应用流程
1)制备靶点
从生物标本中提取核苷酸并进行标记;
(2)杂交
让靶点与芯片上的cdna或寡核苷酸序列进行孵育;
(3)获取数据
扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度
(4)数据分析
从大量数据中得出具有生物学意义的结论
微阵列芯片技术通过测定能够与探针杂交的mrna的数量,反映表达此mrna的基因的转录情况,芯片的构建首先要根据研究的需要选择基因及相应的探针,其次是从标本中提取mrna,表面---化,并制备出靶点,然后将靶点加入芯片,进行孵育杂交、冲洗掉没有杂交的样品以及扫描等操作,得到原始数据,再将这些数据进行标准化和统计分析后得到结论,构造适当的微阵列芯片是开展后续研究的基础。
现阶段,因为敏感度---,大部分方式必须在标识与分析时对样品开展适度的程序增加,但是也有很多人尝试绕开这一难题,如mosaictechnologies企业引入的固相pcr方式,玻璃表面---化原理,引物设计非特异强,无而且免去了液相处理繁琐;lynxtherapeutics企业引入---的并行处理固相法(massivelyparallelsolid-phasecloning),可在一个样品中并且对不计其数的dna精彩片段开展,且不用独立和处理分离出来每一个。
---片的成分为载玻片(盖玻片)、玻片修饰剂(黏附剂),表面---化的意义,常用的黏附剂有apes(3-aminopropyl-triethoxysilane 3-氨----3-乙---)、多聚-l-赖氨酸(poly-l-lysine)、明胶、蛋清等。细胞学常用黏附剂为apes和多聚-l-赖氨酸 ,组织学常用明胶、蛋清等。
一、载玻片和盖玻片的处理
将载玻片或培养用的小盖片浸泡在清洁液中24小时,然后流水充分冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍以上,表面---化的方法,而后置95%---中12小时。取出擦干或烤干,贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄,以上处理程序必须缩短时间,清洁液浸泡只需2小时,流水冲洗注意勿损伤玻片。
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