实际操作时需要注意的是,虽然共价偶联的方法优于物理吸附,但基于---和羧基的抗体固定方法仍具有一定程度的随机性,抗体固定途径,有时在fab区(用于结合抗原)存在易于修饰的---/羧基,在与固体表面偶联后会造成抗体的失活。在抗体领域,抗体与的偶联同样存在上面所说的问题(由于抗体表面可能存在很多可修饰的---酸,不能确定连在哪个部位
这种生物芯片的基因译码速度比传统的sanger和 maxax gilbert法快1000倍,是一种有希望的快速测序方法。1996 年底,---化固定抗体,美国旧金山affym atrix公司 steven fodor等充分结合并灵活运用了照相平板印刷、计算机、半导体、激光共---扫描、寡糖苷酸dna合成、荧光标记探针杂交及分子生物学的其他技术,创造了上块 dna芯片或dna列阵(dna chip/dna arrays),抗体固定后失活,即基因芯片。
物理吸附是简单的抗体固定化方法,包括静电作用、疏水作用、极性相互作用等非共价键作用。优点显而易见—省时省力省钱,抗体固定,缺点也是不可避免—(1)抗体偶联的取向(orientation)不可控,完全由概率来确定;(2)物理吸附作用力弱,应用时有抗体脱离现象。学中,经常用到物理吸附的地方就是一抗的负载过程。比如在elisa板(聚)和侧流试纸条(纤维素膜)等表面负载抗体的时候,用到的就是物理吸附作用。
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