2、贴壁细胞如何分离下来?
如果把贴壁的细胞洗下来常用的办法就是加入胰蛋白酶---,37°c环境下放置3~5min便可,但是残留培养瓶内的胰蛋白酶对细胞有毒性作用,所以都会添加低浓度的以中和胰蛋白酶的。用超声的办法也可以把细胞分离下来,但是要注意超声的频率不能太大,而且细胞很娇嫩,超声会导致细胞的。这是由细胞的性质特点决定的。
一些特殊的促细胞附着的物质(如层粘连蛋白、纤维链接蛋白、iii型胶原、扩展因子等)可能参加细胞的贴附过程。这些促细胞附着因子均为蛋白质,超亲水性细胞培养厂,存在于培养液尤其之中。在培养过程中,这些带阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上,悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附物质的底物附着,以后细胞将伸展成其原来的形态。一-般来说,从底物脱离下来的贴附生长型细胞,不能长期在悬浮中生长而将逐渐退变,除非这是一些转化了的细胞或细胞。另外,上海超亲水性细胞培养,经过无驯化后的细胞,会从贴壁生长转到悬浮生长,目前在生物工程制药领域,趋势是使用无的悬浮培养为主。
培养细胞在木贴附于底物之---般均似球体样;当与底物贴附后,细胞将逐渐伸展而形成一定的形 态,呈成纤维细胞样或上皮细胞样等。细胞附着于底物时并非一-种需要能量的过程,一般认为与电荷有关。据资料记载,37°c时在2min内细胞之间即可形成键,该键可对0. 01%胰蛋白酶起作用且仅发生于细胞之间,而细胞与底物之间则无; 8 min后才有稳定的键形成。
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