2、贴壁细胞如何分离下来?
如果把贴壁的细胞洗下来常用的办法就是加入胰蛋白酶---,37°c环境下放置3~5min便可,但是残留培养瓶内的胰蛋白酶对细胞有毒性作用,所以都会添加低浓度的以中和胰蛋白酶的。用超声的办法也可以把细胞分离下来,超亲水性细胞培养,但是要注意超声的频率不能太大,而且细胞很娇嫩,超声会导致细胞的。这是由细胞的性质特点决定的。
一些特殊的促细胞附着的物质(如层粘连蛋白、纤维链接蛋白、iii型胶原、扩展因子等)可能参加细胞的贴附过程。这些促细胞附着因子均为蛋白质,存在于培养液尤其之中。在培养过程中,这些带阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上,悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附物质的底物附着,以后细胞将伸展成其原来的形态。一-般来说,从底物脱离下来的贴附生长型细胞,不能长期在悬浮中生长而将逐渐退变,除非这是一些转化了的细胞或细胞。另外,经过无驯化后的细胞,会从贴壁生长转到悬浮生长,目前在生物工程制药领域,趋势是使用无的悬浮培养为主。
细胞的性(cell totipotency)是指单个细胞在一定条件下分化发育成为完整个体的能力,具有这种能力的细胞称为性细胞(totipotent cell)。此种现象在植物和低等动物中较常见。如某些植物的单个体细胞,经过体外培养后,可分裂成许多细胞,生长成一个完整的植株。利用细胞性,可进行无性繁殖。
一个性的细胞,应该具有表达其基因组中任何一种基因的能力,亦即能分化为该种生物体内任何一种类型的细胞。理论上,每个配备了完整基因组的细胞,包括体细胞和生殖细胞,都应该是性的。但实际不然,往往是体细胞表达基因的能力比性细胞要低得多。生殖细胞,尤其是卵细胞,尽管分化程度---,超亲水性细胞培养目的,仍然具有较大的潜在性,在某些条件下可进行孤雌生殖,由一个卵---成所有各种类型的细胞。生殖细胞的结合产物──受精卵则表出高的性,超亲水性细胞培养公司,任何一个生物体(无性繁殖后代除外)都由合子起源,由此,个体中的每一个形态和机能各异的细胞都是合子产生后代的分化产物。
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