该方法的主要优点是可以用很少的步骤合成极其大量的探针阵列。例如,合成 48 ( 65536 ) 个探针的 8 聚体寡核苷酸序列仅需 4 × 8=32 步操作, 8 小时就可以完成。而如果用传统方法合成然后点样,那么工作量的---将是不可思议的。同时,用该方法合成的探针阵列密度可---到 106/cm2 。不过,尽管该方法看来比较简单,实际上并非如此。
微阵列芯片应用流程
1)制备靶点
从生物标本中提取核苷酸并进行标记;
(2)杂交
让靶点与芯片上的cdna或寡核苷酸序列进行孵育;
(3)获取数据
扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度
(4)数据分析
从大量数据中得出具有生物学意义的结论
微阵列芯片技术通过测定能够与探针杂交的mrna的数量,抗体固定后失活,反映表达此mrna的基因的转录情况,芯片的构建首先要根据研究的需要选择基因及相应的探针,elisa固定抗体,其次是从标本中提取mrna,---化固定抗体,并制备出靶点,然后将靶点加入芯片,进行孵育杂交、冲洗掉没有杂交的样品以及扫描等操作,得到原始数据,再将这些数据进行标准化和统计分析后得到结论,构造适当的微阵列芯片是开展后续研究的基础。
尽管如此,通常原位合成方法仍然比较复杂,除了在基因芯片研究方面享有盛誉的 affymetrix 等公司使用该技术合成探针外,其它中小型公司大多使用合成点样法。后一方法在多聚物的设计方面与前者相似,合成工作用传统的 dna 或多肽固相合成仪以完成,上海抗体固定,只是合成后用特殊的自动化微量点样装置将其以比较高的密度涂布于纤维膜、尼龙膜或玻片上。支持物应事---行特定处理,例如包被以带正电荷的多聚赖酸或------。现在已有比较成型的点样装置出售,如美国 biodot 公司的点膜产品以及 cartesian technologies 公司的 pixsys nq/pa 系列产品。前者产生的点阵密度可以达到 400/cm2 ,后者则可达到 2500/cm2 。
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